Imunoglobulina E totală (IgE) Ce este IgE totală Imunoglobulinele E (IgE) sunt anticorpi care se leagă prin fragmentul…
Autoimunitate
ANCA (cANCA+pANCA)- imunofluorescenta
Despre analiza
NCA – anticorpi anti-citoplasmă neutrofilă (cANCA, pANCA) prin imunofluorescență
Ce sunt anticorpii anti-citoplasmă neutrofilă (ANCA)
ANCA (din engleză anti-neutrophil cytoplasmic antibodies) sunt autoanticorpi îndreptați împotriva unor enzime din citoplasma neutrofilelor și a monocitelor. Neutrofilele sunt globulele albe care distrug primele bacteriile. Ținta ANCA sunt enzimele din granulațiile primare (azurofile) ale acestor celule. Anticorpii sunt în principal de tip IgG, mai rar IgA sau IgM. Au fost descriși pentru prima dată în 1982, la pacienți cu glomerulonefrită autoimună.
ANCA sunt markerii principali ai vasculitelor asociate ANCA. Acestea sunt inflamații ale vaselor mici de sânge, numite și vasculite pauciimune, pentru că în peretele vaselor nu se găsesc depozite de complexe imune. Neutrofilele activate de anticorpi atacă endoteliul și produc necroză în peretele venulelor, capilarelor și arteriolelor. Cele mai afectate organe sunt rinichii (glomerulonefrită), plămânii, căile respiratorii superioare, pielea și nervii periferici.
Aspectele de imunofluorescență
Testul de screening este imunofluorescența indirectă pe neutrofile umane fixate cu etanol. După felul în care se colorează celulele, se descriu trei aspecte:
| Aspect | Cum arată la microscop | Antigen-țintă principal | Asociere clinică principală |
|---|---|---|---|
| cANCA(citoplasmatic) | Fluorescență granulară în citoplasmă, accentuată central, între lobii nucleului | Proteinaza 3 (anti-PR3) | Granulomatoza cu poliangeită (boala Wegener) |
| pANCA(perinuclear) | Fluorescență omogenă în jurul nucleului, fără colorarea citoplasmei | Mieloperoxidaza (anti-MPO) | Poliangeita microscopică, glomerulonefrita rapid progresivă, granulomatoza eozinofilică cu poliangeită (Churg-Strauss) |
| xANCA(atipic) | Fluorescență perinucleară neomogenă | Lactoferină, catepsină G, elastază, lizozim, BPI, catalază, enolază și alte antigene | Colita ulcerativă, boala Crohn, colangita sclerozantă primitivă, hepatita autoimună, sindromul Felty |
Aspectul pANCA apare din cauza fixării cu etanol. Mieloperoxidaza are sarcină pozitivă și migrează spre membrana nucleului, care are sarcină negativă. Pe neutrofile fixate cu formalină antigenul rămâne pe loc, așa că pANCA adevărați dau o colorare citoplasmatică. Compararea celor două substraturi ajută la deosebirea pANCA adevărați de anticorpii antinucleari (ANA). ANA pot imita aspectul pANCA pe etanol, dar dispar sau scad pe formalină.
Asocieri clinice
| Boală | Aspect ANCA tipic |
|---|---|
| Granulomatoza cu poliangeită (Wegener) | cANCA (anti-PR3), la majoritatea pacienților cu boală activă; frecvență mai mică în formele fără afectare renală |
| Poliangeita microscopică | pANCA (anti-MPO) sau, mai rar, cANCA |
| Glomerulonefrita necrotizantă pauciimună / rapid progresivă | pANCA (anti-MPO), la marea majoritate |
| Granulomatoza eozinofilică cu poliangeită (Churg-Strauss) | pANCA, mai rar cANCA |
| Poliarterita nodoasă clasică | Rar pANCA |
| Colita ulcerativă, boala Crohn, colangita sclerozantă primitivă, hepatita autoimună | xANCA (atipic) |
Indicații
Medicul poate recomanda testul în următoarele situații:
- glomerulonefrită, mai ales forma rapid progresivă;
- hemoragie pulmonară sau noduli pulmonari multipli;
- vasculită cutanată cu manifestări sistemice;
- afecțiuni cronice distructive ale căilor respiratorii superioare, sinuzite sau otite cu evoluție îndelungată, stenoză traheală subglotică;
- mononevrită multiplă sau alte neuropatii periferice;
- masă retroorbitară;
- boli inflamatorii de cauză neprecizată;
- evaluarea bolilor inflamatorii intestinale și a bolilor hepatice autoimune, pentru xANCA.
Pregătirea pacientului
Nu este necesară o pregătire specială. Recoltarea se poate face à jeun (pe nemâncate) sau după masă.
Menționați laboratorului dacă urmați tratament cortizonic sau imunosupresor. Menționați și medicamentele care pot induce ANCA, de exemplu propiltiouracilul, hidralazina sau minociclina.
Recoltare
| Parametru | Cerință |
|---|---|
| Probă | Ser |
| Tub de recoltare | Eprubetă vidată de 5 mL, cu gel separator (capac roșu-galben) |
| Volum minim | 2 mL ser |
| Pregătirea probei | Centrifugare și separarea serului |
| Conservare | 7 zile la 2–8 °C; pentru păstrare mai lungă, la −20 °C |
| Probă neconformă | Ser intens hemolizat, lipemic sau contaminat bacterian |
Metodă
Determinarea se face prin imunofluorescență indirectă (IIF). Serul diluat al pacientului este pus în contact cu neutrofile umane fixate cu etanol și cu formalină. Dacă serul conține ANCA, aceștia se leagă de antigenele din citoplasma neutrofilelor. Legarea se vizualizează la microscopul cu fluorescență, cu un anticorp anti-IgG uman marcat fluorescent. Se citesc aspectul fluorescenței (cANCA, pANCA, xANCA) și titrul.
În funcție de sistemul folosit, pe aceeași lamă pot exista și alte substraturi de control:
- celule HEp-2, pentru recunoașterea ANA;
- ficat de primată;
- spoturi cu antigene purificate MPO și PR3.
Ghidurile internaționale recomandă ca rezultatul pozitiv la imunofluorescență să fie completat cu testele imunoenzimatice specifice pentru anti-MPO și anti-PR3.
Valori de referință
| Rezultat | Titru |
|---|---|
| Negativ | < 1:10 |
| Pozitiv | ≥ 1:10, cu precizarea aspectului (cANCA, pANCA sau xANCA) |
Transformarea unităților de măsură
Rezultatul se exprimă ca titru, adică cea mai mare diluție a serului la care se mai observă fluorescență (de exemplu 1:10, 1:32, 1:100, 1:320). Titrul nu se transformă în alte unități de măsură. Pentru concentrația anticorpilor specifici se folosesc testele cantitative anti-MPO și anti-PR3.
Interpretarea rezultatelor
| Rezultat | Interpretare |
|---|---|
| cANCA pozitiv | Sugerează granulomatoza cu poliangeită. Se confirmă prin anticorpi anti-PR3. |
| pANCA pozitiv | Sugerează poliangeită microscopică, glomerulonefrită pauciimună sau granulomatoză eozinofilică cu poliangeită. Se confirmă prin anticorpi anti-MPO, după excluderea ANA care imită pANCA. |
| xANCA pozitiv(atipic) | Orientează spre boli inflamatorii intestinale, colangită sclerozantă primitivă sau hepatită autoimună. MPO și PR3 sunt de obicei negativi. Ținta poate fi identificată prin teste separate, de exemplu anti-lactoferină sau anti-catepsină G. |
| Negativ (< 1:10) | Nu s-au detectat ANCA. Un rezultat negativ nu exclude o vasculită. Există vasculite fără ANCA, iar unii pacienți sub tratament devin negativi. |
Un rezultat pozitiv se raportează întotdeauna cu titrul și cu aspectul. La pacienții cu vasculită, nivelul ANCA poate scădea mult sau se poate negativa sub tratament imunosupresor. Deciziile de tratament nu se iau însă doar pe baza titrului, ci și pe baza evoluției clinice.
Medicul interpretează rezultatul împreună cu:
- tabloul clinic și biopsia;
- funcția renală: creatinina și examenul complet de urină;
- markerii de inflamație: VSH și proteina C reactivă.
Mai multe despre ANCA găsiți în articolul pANCA, cANCA. Anticorpii citoplasmatici antineutrofile.
Limite și interferențe
| Limită | Explicație |
|---|---|
| Nu este test de screening | Testul nu se recomandă la persoane fără simptome. Un singur rezultat ANCA pozitiv nu este suficient pentru decizii clinice. |
| Interferența ANA | ANA pot da o fluorescență care imită pANCA pe neutrofilele fixate cu etanol. Diferențierea se face pe substratul fixat cu formalină și pe HEp-2. |
| Anticorpi antinucleari specifici granulocitelor (GS-ANA) | Dau o fluorescență nucleară sau perinucleară pe etanol, dar sunt negativi pe HEp-2. Apar mai ales în artrita reumatoidă. |
| ANCA în alte boli | Pot apărea și în alte situații: lupus eritematos sistemic, lupus indus medicamentos, sindrom Sjögren, polimiozită și dermatomiozită, artrită reumatoidă, artrită reactivă, sindrom antifosfolipidic, sindroame mielodisplazice, infecție HIV, endocardită bacteriană subacută, unele infecții parazitare și fungice, fibroză chistică, unele cancere. |
| Necesită confirmare | Aspectele cANCA și pANCA se confirmă prin testele imunoenzimatice anti-PR3 și anti-MPO. |
| Tratament imunosupresor | Poate scădea titrul sau negativa rezultatul. |
| Calitatea probei | Hemoliza intensă, lipemia și contaminarea bacteriană pot influența rezultatul. |
Bibliografie
- MSD Manual Professional Version. Granulomatosis With Polyangiitis (GPA). Merck & Co., Inc., 2026.
- MSD Manual Professional Version. Microscopic Polyangiitis (MPA). Merck & Co., Inc., 2026.
Cum decurge
- 1Comanzi online sau vii directPentru analizele cu plata nu e nevoie de programare.
- 2Recoltezi in oricare centru NPAL–V 7:30–16:30 · Sambata 7:30–12:00
- 3Primesti rezultatul in portalValidat de medicul de laborator, cu notificare pe e-mail.