Borrelia – anticorpi IgG și IgM blot

Borrelia – anticorpi IgG și IgM blot

Ce este testul de confirmare prin imunoblot

Boala Lyme (borrelioza Lyme) este o infecție produsă de spirochete din complexul Borrelia burgdorferi sensu lato, transmisă prin mușcătura de căpușă. În Europa, vectorul este căpușa Ixodes ricinus. Mai multe despre boală găsiți în articolul Borrelioza sau boala Lyme.

Speciile de Borrelia din Europa:

• B. afzelii și B. garinii sunt speciile principale;
• B. burgdorferi sensu stricto este prezentă în unele zone;
• B. spielmanii și B. bavariensis au fost identificate mai recent.

Speciile diferă între ele prin structura antigenelor, iar unele antigene (de exemplu OspC) variază mult de la o specie la alta. De aceea, un test bun pentru Europa trebuie să conțină antigene de la mai multe specii.

De ce este nevoie de confirmare. Diagnosticul serologic al bolii Lyme se face în două etape:

1. Screening, cu un test imunoenzimatic sensibil (ELISA sau CLIA), de exemplu serologia Borrelia burgdorferi IgM și IgG.
2. Confirmare prin imunoblot, pentru rezultatele pozitive sau echivoce de la screening. Rezultatele negative la screening nu mai necesită confirmare.

Testul de față este testul de confirmare. Arată față de ce antigene ale bacteriei s-au format anticorpi IgM și IgG.

Ce antigene arată un răspuns precoce sau tardiv:

• răspunsul precoce se face mai ales prin anticorpi IgM, iar antigenul cel mai sensibil pentru IgM este OspC. Proteina flagelară p41 apare și ea frecvent;
• răspunsul tardiv se face prin anticorpi IgG, cu benzi intense pentru p58 și p39;
• VlsE este cel mai sensibil antigen pentru IgG. Apare precoce în răspunsul IgG, dar se găsește și în formele tardive;
• p58 și p17 cresc sensibilitatea pentru IgG în stadiile II și III;
• anticorpii IgG puternici față de OspA și OspB au fost observați în artrita Lyme prelungită.

Antigenele recombinante sunt produse în laborator, pe tulpini de E. coli. Comparativ cu lizatul bacterian clasic, ele permit combinarea antigenelor de la mai multe specii în același test și reduc reacțiile încrucișate.

Indicații

• Confirmarea unui rezultat pozitiv sau echivoc la screeningul serologic pentru Borrelia (ELISA sau CLIA).
• Precizarea stadiului răspunsului imun, prin profilul antigenelor recunoscute de anticorpii IgM și IgG.
• Evaluarea unei posibile infecții cu Anaplasma phagocytophilum, transmisă tot prin căpușe. Testul conține și antigene pentru această bacterie.

Pregătirea pacientului

Recoltarea se face, de preferat, à jeun (pe nemâncate).

Recoltare

Metodă

Imunoblot în format Microblot.

Antigenele din test:

Valori de referință

Rezultatul pentru fiecare antigen (intensitatea spotului):

Interpretarea finală pentru Borrelia, după rezultatul la VlsE și la celelalte antigene (p83, p58, p41, p39, OspB, OspA, OspC, NapA, p17):

Interpretarea finală pentru Anaplasma phagocytophilum (p44, OmpA, Asp62):

Interpretarea rezultatelor

Rezultat pozitiv. Confirmă prezența anticorpilor specifici față de Borrelia burgdorferi sensu lato:

• în stadiile precoce predomină anticorpii IgM, cu reacție caracteristică față de OspC;
• în stadiile tardive predomină anticorpii IgG, cu benzi intense pentru p58 și p39. VlsE apare atât precoce, cât și în formele tardive;
• un rezultat pozitiv nu înseamnă în toate cazurile o boală activă. Anticorpii IgG persistă mult timp și pot proveni de la o infecție veche;
• dacă boala durează de mai mult de o lună, un rezultat IgM pozitiv izolat nu se folosește pentru diagnosticul de boală activă, deoarece rezultatele fals pozitive sunt frecvente în această situație.

Rezultat negativ. Nu exclude infecția cu Borrelia, mai ales în stadiul precoce:

• anticorpii pot să nu se fi format încă;
• tratamentul antibiotic început devreme poate întârzia sau împiedica formarea lor;
• dacă suspiciunea clinică persistă, se recomandă repetarea recoltării după 3 săptămâni.

Rezultat echivoc. Se repetă testarea după 3 săptămâni, dacă suspiciunea clinică persistă.

Afectarea neurologică. Prezența anticorpilor anti-Borrelia în LCR sugerează neuroborrelioza. Pentru diagnostic, anticorpii se determină simultan în ser și în LCR, cu calculul indexului de anticorpi LCR/ser. La nevoie, se poate face și ADN-ul de Borrelia prin PCR din LCR.

Anaplasma. Un rezultat pozitiv pentru antigenele de Anaplasma phagocytophilum sugerează o infecție cu această bacterie. Se poate confirma prin anticorpi anti-Ehrlichia/Anaplasma sau prin Ehrlichia/Anaplasma ADN-PCR.

Rezultatele serologice se corelează întotdeauna cu anamneza (expunerea la căpușe) și cu datele clinice. Interpretarea se face de medic (infecționist, neurolog, reumatolog).

Limite și interferențe

• Reacții încrucișate. Antigenele recombinante selective reduc reacțiile încrucișate din alte infecții, de exemplu sifilisul, febra recurentă sau leptospiroza. Totuși, la pacienții cu sifilis activ sau în antecedente, serul poate conține anticorpi față de p41. În această situație, testul include antigenul TpN17 (Treponema pallidum), iar sifilisul trebuie exclus prin teste specifice: RPR și TPHA.
• Persistența anticorpilor IgG. Un rezultat pozitiv poate reflecta o infecție trecută. Analiza nu se folosește pentru controlul vindecării.
• Tratamentul antibiotic precoce poate împiedica formarea anticorpilor.
• Testul de confirmare se face doar după un screening pozitiv sau echivoc. Rezultatele se interpretează întotdeauna împreună cu anamneza și cu datele clinice.

Bibliografie:

1. Centers for Disease Control and Prevention (CDC). Recommendations for Test Performance and Interpretation from the Second National Conference on Serologic Diagnosis of Lyme Disease. MMWR. 1995;44(31):590–591.
2. Centers for Disease Control and Prevention (CDC). Lyme Disease – Diagnosis and Testing (for clinicians).
3. Lantos PM, Rumbaugh J, Bockenstedt LK, et al. IDSA/AAN/ACR 2020 Guidelines for the Prevention, Diagnosis and Treatment of Lyme Disease. Clin Infect Dis. 2021;72(1):e1–e48.
4. European Centre for Disease Prevention and Control (ECDC). Facts about Lyme borreliosis.
5. TestLine Clinical Diagnostics / Goffin Diagnostics. Microblot-Array Borrelia IgG (BGMA096) și Microblot-Array Borrelia IgM (BMMA096) – fișe de produs.
6. Goffin Diagnostics. Why broad antigen coverage matters in European Lyme serology (notă de aplicație).