Imunoglobulina E totală (IgE) Ce este IgE totală Imunoglobulinele E (IgE) sunt anticorpi care se leagă prin fragmentul…
Alergologie
Test de transformare limfoblastică (LTT) – 1 medicament
Important
Se recolteaza doar in zilele de marti cu programare prealabila.
Despre analiza
Test de transformare limfoblastică (LTT) – 1 medicament
Ce este testul de transformare limfoblastică
LTT este un test care caută, în sângele pacientului, limfocite T sensibilizate față de un anumit medicament. Este singura metodă de laborator care demonstrează direct sensibilizarea celulelor T, fără a expune pacientul la medicamentul suspectat.
Contextul clinic. Reacțiile adverse la medicamente afectează 10–20% dintre pacienții spitalizați și până la 25% dintre cei tratați ambulator. Ele se împart în două categorii:
- tip A: previzibile, legate de acțiunea farmacologică a medicamentului și de doză
- tip B: neprevizibile, apărute doar la unele persoane, la doze tolerate de restul pacienților. Acestea sunt reacțiile de hipersensibilitate.
Reacțiile de hipersensibilitate pot fi alergice (imune) sau non-alergice (intoleranță, idiosincrazie). Reacțiile alergice explică între o șesime și o treime dintre efectele adverse și pot fi severe sau letale.
De ce sunt greu de diagnosticat. Alergia medicamentoasă nu se manifestă întotdeauna „tipic", prin urticarie, angioedem sau anafilaxie. Poate imita aproape orice boală: hepatită, nefrită, pneumopatie interstițială, erupții cutanate de orice tip, vasculite, citopenii. Din acest motiv, cauza reală este adesea omisă.
Clasificarea reacțiilor alergice medicamentoase (Gell și Coombs), cu exemplul penicilinelor:
| Tip | Mecanism | Manifestări |
|---|---|---|
| I | Mediat IgE (imediat) | Anafilaxie acută, urticarie |
| II | Citoliză mediată IgG/IgM, cu activarea complementului | Anemie hemolitică, trombocitopenie |
| III | Complexe imune | Boala serului, febră medicamentoasă, vasculită cutanată |
| IV | Mediat celular, de tip întârziat | Dermatită de contact, erupții morbiliforme, nefrită interstițială, hepatită, sindrom Stevens-Johnson, necroliză epidermică toxică |
Reacțiile de tip IV au fost ulterior subclasificate în funcție de tipul de limfocit T implicat și de celulele efectoare recrutate:
- IVa (Th1, macrofage): reacția tuberculinică, granuloame
- IVb (Th2, eozinofile): exanteme maculopapuloase cu eozinofilie, sindromul DRESS
- IVc (limfocite T citotoxice): erupții buloase, sindrom Stevens-Johnson, necroliză epidermică toxică, hepatită și nefrită medicamentoasă
- IVd (neutrofile): pustuloza exantematoasă acută generalizată (AGEP)
Reacțiile de tip întârziat apar de regulă la peste 6 ore de la administrare, adesea în ziua 8–10 de tratament, și se manifestă cel mai frecvent cutanat.
Limfocitele T au rol central în toate tipurile de alergie: recunosc medicamentul, se activează, se transformă în celule cu memorie și declanșează răspunsul prin citokinele eliberate. LTT valorifică exact această proprietate.
Principiul testului
- Din sângele venos al pacientului se izolează celulele mononucleare, prin gradient Ficoll.
- Celulele sunt puse în cultură timp de 5 zile, împreună cu medicamentul suspectat.
- Se măsoară proliferarea celulară, prin încorporarea timidinei marcate radioactiv în ADN-ul celulelor care se divid.
- Rezultatul se exprimă ca indice de stimulare (SI): raportul dintre proliferarea în prezența medicamentului și proliferarea spontană, fără medicament.
Testul include un control pozitiv (un antigen de memorie, care verifică dacă limfocitele pacientului sunt capabile să prolifereze) și un control negativ (proliferarea spontană).
Efectuat cu indicație corectă și interpretat într-un centru cu experiență, testul are o sensibilitate și o specificitate de circa 78–85%.
Indicații
- Suspiciune de alergie medicamentoasă de tip întârziat (tip IV), după o reacție documentată clinic
- Identificarea medicamentului responsabil, când pacientul a primit mai multe medicamente simultan
- Situații în care testul de provocare este contraindicat din motive de siguranță: reacții severe, sindrom Stevens-Johnson, necroliză epidermică toxică, DRESS
- Reacții la anestezice locale, înaintea unei intervenții stomatologice sau chirurgicale
- Evaluarea pacienților cu reacții atipice, care pot fi de cauză imună: hepatită, nefrită, pneumopatie interstițială, citopenii, vasculită
- Confirmarea sau infirmarea unei etichete de „alergie la penicilină", care limitează inutil opțiunile terapeutice
Momentul optim al testării: între 2 săptămâni și 3 luni de la episodul acut. Testat prea devreme, rezultatul poate fi negativ. În unele cazuri, testul rămâne pozitiv și după ani de zile.
Recoltare
| Condiții de recoltare | Pacientul trebuie să aducă mostra de medicament, anestezic sau substanță de testat, pe ambalajul căreia să fie vizibile denumirea completă și termenul de valabilitate. Cu 10 zile înainte de recoltare se întrerup, numai la indicația medicului: corticosteroizii, citostaticele, medicamentele imunosupresoare și morfina. Recoltarea se face doar cu programare, în zilele și intervalele orare stabilite, din cauza stabilității reduse a probei. |
| Tip probă | Sânge integral heparinat și ser |
| Material biologic | 20 mL sânge venos recoltat pe eprubete cu heparină de litiu (capac verde) și 5 mL sânge pe eprubetă vidată cu gel separator (capac roșu-galben), pentru ser |
| Procesare după recoltare | Proba se păstrează și se transportă la temperatura camerei. Trebuie să ajungă la laboratorul care efectuează testul în maximum 24 de ore. |
| Proba este stabilă | Maximum 24 de ore, la temperatura camerei |
| Motive respingere probă | Probă refrigerată sau congelată (contraindicat). Probă care a depășit 24 de ore de la recoltare. Volum insuficient. Lipsa mostrei de medicament. |
Metodă
Cultură de limfocite cu măsurarea proliferării prin încorporarea timidinei marcate radioactiv în ADN-ul celular. Rezultatul se exprimă ca indice de stimulare (SI).
Medicamente standard disponibile pentru testare:
| Categorie | Substanțe |
|---|---|
| Antibiotice | Penicilină V, penicilină G, amoxicilină, ampicilină, amoxicilină + acid clavulanic, trimetoprim + sulfametoxazol, doxiciclină, claritromicină, clindamicină, ciprofloxacină, roxitromicină, ceftriaxonă, metronidazol |
| Analgezice și antireumatice | Acid acetilsalicilic, diclofenac, ibuprofen, paracetamol, indometacin, metamizol, tramadol |
| Antihipertensive | Metoprolol, captopril, enalapril, ramipril, candesartan |
| Anestezice locale | Mepivacaină, articaină, lidocaină, prilocaină, Ubistesin |
| Altele | Allopurinol, butilscopolamină (Buscopan), carbamazepină, omeprazol, prednisolon, simvastatină, torasemid |
Pentru alte substanțe, testarea este posibilă dacă pacientul aduce mostra de medicament.
Valori de referință
| Indice de stimulare (SI) | Interpretare |
|---|---|
| < 2 | Negativ: nu există sensibilizare de tip IV față de substanța testată |
| 2–3 | Sugestiv pentru o reacție pozitivă |
| > 3 | Net pozitiv |
Rezultat neconcludent. Apare când nu sunt îndeplinite criteriile de validare: controlul pozitiv nu arată activarea limfocitelor sau controlul negativ arată o proliferare spontană crescută. Dacă recoltarea și transportul au fost corecte, cauzele posibile sunt tratamentul prelungit cu imunosupresoare sau hiperactivitatea sistemului imun.
Interpretarea rezultatelor
Rezultat pozitiv. Indică prezența limfocitelor T cu memorie specifice pentru medicamentul testat, deci sensibilizare. Sensibilizarea arată predispoziția la reacții alergice, dar nu înseamnă obligatoriu că pacientul va face o reacție clinică. Rezultatul se interpretează întotdeauna împreună cu anamneza și tabloul clinic al episodului.
Probabilitatea unui rezultat pozitiv depinde de tipul reacției:
| LTT frecvent pozitiv (peste 50%) | LTT ocazional pozitiv | LTT rar pozitiv (sub 10%) |
|---|---|---|
| Exantem maculo-papulos generalizat Exantem bulos Pustuloză exantematoasă acută generalizată (AGEP) Sindrom DRESS (hipersensibilitate cu eozinofilie și simptome sistemice) Anafilaxie severă |
Hepatită medicamentoasă Nefrită Urticarie Angioedem Pneumonită interstițială Pancreatită |
Necroliză epidermică toxică Vasculită Exantem macular fără infiltrat cu celule T Sindrom Guillain-Barré Discrazii sanguine Anemie hemolitică Erupție medicamentoasă fixă |
Rezultatele pozitive se obțin cel mai frecvent pentru peniciline și alte beta-lactamine, sulfonamide, carbamazepină și fenitoină. Mai rar pentru inhibitori ai enzimei de conversie, diuretice, anestezice locale, antiinflamatoare nesteroidiene, nitrofurantoin, chinidină și nistatin.
Rezultat negativ. Nu exclude o reacție la medicamentul respectiv. Explicații posibile:
- reacția nu a fost mediată imunologic
- testul a fost efectuat prea devreme după episod, prea târziu sau prea curând după tratamentul cu corticosteroizi
- reacția este produsă de un metabolit al medicamentului, care nu se formează în cultura celulară
- medicamentul testat inhibă el însuși încorporarea timidinei
- numărul de limfocite cu memorie specifice este prea mic
Decizia de a relua sau de a evita definitiv medicamentul aparține medicului alergolog, care integrează rezultatul cu anamneza, tabloul clinic, testele cutanate și, când este posibil și sigur, testul de provocare.
Limite și interferențe
- Nu există un „standard de aur" pentru diagnosticul alergiei medicamentoase. LTT este un element dintr-un raționament, nu un verdict.
- Testul nu este standardizat pentru orice medicament. Calitatea și puritatea substanței testate influențează decisiv rezultatul: cu substanțe impure cresc rezultatele fals pozitive.
- Alergia la metaboliți ai medicamentului nu este detectată, deoarece metaboliții nu se formează în cultura celulară.
- Corticosteroizii, citostaticele, imunosupresoarele și morfina inhibă proliferarea limfocitelor și pot produce rezultate fals negative. Întreruperea lor cu 10 zile înainte este esențială și se face numai cu acordul medicului curant.
- Momentul recoltării contează: prea devreme după episod sau la un interval foarte lung, rezultatul poate fi negativ.
- Stabilitatea probei este foarte scurtă. Refrigerarea distruge celulele și invalidează testul.
- Sensibilitatea și specificitatea nu pot fi verificate sistematic prin teste de provocare, din motive etice.
- Stabilirea pragului de pozitivitate și interpretarea rezultatelor necesită experiență. Testul nu poate fi automatizat.
Cum decurge
- 1Comanzi online sau vii directPentru analizele cu plata nu e nevoie de programare.
- 2Recoltezi in oricare centru NPAL–V 7:30–16:30 · Sambata 7:30–12:00
- 3Primesti rezultatul in portalValidat de medicul de laborator, cu notificare pe e-mail.